Importancia de los macrófagos cargados con hemosiderina en el diagnóstico de la hemorragia alveolar difusa / Importance of hemosiderin-loaded macrophages in diagnosis of diffuse alveolar hemorrhage / A importância dos macrófagos carregados com hemosiderina no diagnóstico de hemorragia alveolar difusa / Reconocimiento a la trayectoria del Prof. Dr. Juan Miguel Castagnino†

Resumen La hemorragia alveolar difusa (HAD) es un síndrome clínico con una alta mortalidad que compromete la función respiratoria. Su diagnóstico se basa en pruebas clínicas, radiológicas y citológicas. El objetivo del trabajo fue ratificar el valor de referencia de hemosiderófagos en lavados broncoalveolares (BAL) (hemosiderófagos ≥20%), correlacionar con la etiología y definir las condiciones preanalíticas para que la reacción de Perls alcance valores elevados de sensibilidad. De 109 muestras de pacientes con sospecha de HAD, se analizaron 90 por cumplir los criterios de inclusión; 36 resultaron positivas para HAD, 3 falsamente negativas y 51 resultaron negativas. La sensibilidad fue de 92% y la especificidad de 100%. La mediana de hemosiderófagos para muestras con diagnóstico de HAD fue de 70%. Se agruparon según la etiología: procesos infecciosos puros (PI), enfermedades autoinmunes puras (EA), enfermedades neoplásicas puras (EN), enfermedades autoinmunes más procesos infecciosos (EA+PI), enfermedades neoplásicas más procesos infecciosos (EN+PI), misceláneas (MI). La mediana de hemosiderófagos para cada grupo fue: PI (n=7) 50%, EA (n=15) 58%, EN (n=6) 73%, EA+PI (n=5) 80%, EN+PI (n=4) 80%, MI (n=2) 45% (p=0,57). El porcentaje de pacientes fallecidos fue de 49% (n=19), con una mediana de hemosiderófagos de 70%, en comparación con la de pacientes no fallecidos de 64% (p=0,25). Se ratificó el valor de referencia para establecer el diagnóstico de HAD en muestras de BAL obtenidas luego de las 36 h de comenzados los síntomas utilizando la reacción de Perls, la cual demuestra una alta sensibilidad y especificidad para dicho diagnóstico.

Abstract Difusse alveolar hemorrhage (DAH) is a clinical syndrome with high mortality. Its diagnosis is based on clinical, radiological and cytological tests. The objective of this study was to ratify the reference value of hemosiderophages in bronchoalveolar lavages (BAL) (hemosiderophagues ≥20%), to correlate with the etiology and define the pre-analytical conditions for the Perls reaction to reach high sensitivity values. Out of the 109 samples from patients with suspected ADH, 90 were analysed for meeting the inclusion criteria; 36 were positive for HAD, 3 were false negatives, and 51 were negative (sensitivity 92%; specificity 100%). The median number of hemosiderophagues for samples with a diagnosis of ADH was 70%; they were grouped according to etiology: pure infectious processes (PI), pure autoimmune diseases (AD), pure neoplastic diseases (ND), autoimmune diseases plus infectious processes (AD + PI), and miscellaneous (MI). The median number of hemosiderophagues for each group was: PI (n=7) 50%, AD (n=15) 58%, ND (n=6) 73%, AD + PI (n=5) 80%, ND + PI (n=4) 80%, MI (n=2) 45% (p=0.57). The percentage of deceased patients was 49% (n=19), with a median hemosiderophague of 70%, compared with 64% of non-deceased patients (p=0.25). The reference value to establish the diagnosis of ADH in BAL simples obtained 36 hours after the beginning of symptoms using the Perls reaction was ratified, which shows a high sensitivity and specificity to make the diagnosis of ADH.

Resumo A hemorragia alveolar difusa (HAD) é uma síndrome clínica com alta mortalidade que compromete a função respiratória. Seu diagnóstico se baseia em testes clínicos, radiológicos e citológicos. O objetivo do trabalho foi ratificar o valor de referência de hemossiderófagos em lavagens broncoalveolares (LBA) (hemossiderófagos ≥20%), relacioná-los com a etiologia e definir as condições pré-analíticas para que a reação de Perls alcance valores elevados de sensibilidade. De 109 amostras de pacientes com suspeita de HAD, 90 foram analisadas para cumprir com os critérios de inclusão; 36 resultaram positivas para HAD, 3 foram falsos negativos e 51 resultaram negativas. A sensibilidade foi de 92% e a especificidade de 100%. A média de hemossiderófagos para amostras com diagnóstico de HAD foi de 70%, eles foram agrupados de acordo com a etiologia: processos infecciosos puros (PI), doenças autoimunes puras (DA), doenças neoplásicas puras (DN), doenças autoimunes mais processos infecciosos (DA+PI), doenças neoplásicas mais processos infecciosos (DN+PI), miscelâneas (MI). A média de hemossiderófagos para cada grupo foi: PI (n=7) 50%, DA (n=15) 58%, DN (n=6) 73%, DA+PI (n=5) 80%, DN+PI (n=4) 80%, MI (n = 2) 45% (p= 0,57). A porcentagem de pacientes falecidos foi de 49% (n=19), com uma média de hemossiderófagos de 70%, em comparação com 64% de pacientes não falecidos (p=0,25). Foi ratificado o valor de referência para estabelecer o diagnóstico de HAD em amostras LBA obtidas 36 horas após o início dos sintomas através da reação de Perls, que apresenta alta sensibilidade e especificidade para esse diagnóstico.

Estudio multicéntrico de disfunción vaginal de la Red Nacional de Laboratorios BACOVA de la República Argentina: prevalencia, influencia de factores seleccionados, evaluación clínica y distribución de casos por región / Multicenter study on vaginal dysfunction of the National Network of BACOVA Laboratories in Argentina: prevalence, influence of selected factors, clinical evaluation and case distribution by region / Estudo multicêntrico de disfunção vaginal da Rede Nacional de Laboratórios BACOVA da República Argentina: prevalência, influência de fatores selecionados, avaliação clínica e distribuição dos casos por região

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Abstract The aims of this study were to update the prevalence of vaginal dysfunction (VD) in non-pregnant women of childbearing age, pregnant women and menopausal women, to analyse microbiological aspects, to evaluate the influence of parity and contraception in the vaginal microenvironment, to analyse case studies, and to compare the prevalence in the five regions of Argentina: Northeast, Northwest, Centre, Cuyo and South. Eight thousand three hundred twenty-four (8324) vaginal content samples of patients from 39 institutions, examined between May 2019 and June 2020, were prospectively and consecutively studied. The samples were analysed applying the standardized BAVACO-VIR methodology (study of the balance of vaginal content and genital inflammatory response). Of the 8324 samples, 5947 (71.5%) corresponded to women of childbearing age; 1627 (19.5%) to pregnant women and 750 (9.0%) to menopausal women. The most frequent basic vaginal state (BVS) in the three groups was BVS I with normal microbiota, accounting for 33.5% of the entire studied population. Moreover, 66.5% of vaginal dysfunction states were detected. In the pregnant women and menopausal women group there was a significant increase in the frequency of normal BVS I, in contrast with the group of women of childbearing age, where a significant increase of vaginosis and vaginitis was observed. In asymptomatic women, a predominance of BVS I was detected in the three groups. In symptomatic women, there was a predominance of BVS II and V in pregnant women, of BVS II, IV and V in women of childbearing age, and of BVS III and V in menopausal women. Asymptomatic VD was detected in 56.6% of pregnant women, 62.8% of women of childbearing age and 50.9% of menopausal women. A significantly positive association was detected between the presence of yeasts and BVS II and V and the presence of trichomonas and BVS V. The multiparity history variable showed a statistically significant positive association with BVS V and a negative association with BVS I. With regard to contraception, in women who used hormonal contraceptives it was observed that oral contraceptives increased the frequency of BVS I and II and decreased the frequency of BVS III, IV and V of VD; in those who used an intradermal device, there was a decrease in the frequency of BVS I, II and III and an increase in the frequency of BVS IV and V, whereas in women using injectable contraceptives, there was no association. The intrauterine device decreased the frequency of BVS I and II and increased the frequency of BVS V; the condom increased the frequency of BVS IV and the rhythm method decreased the frequency of BVS II. In BVS I, a decrease in the frequency of signs and symptoms was detected. The prevalence of VD in some regions accounted for values over 80%, a higher figure than that described at the national and international levels, which reflects the poor and insufficient action in Sexual and Reproductive Health. The high percentage of asymptomatic women with VD highlights the importance of studying the vaginal content, even in the absence of symptoms. A history of multiparity and contraception showed a link with vaginal function, reflecting the importance of considering this fact in a gynecological evaluation. Although the relationship of BVS with signs and symptoms does not constitute a diagnostic tool, it contributes to the understanding of pathogenic mechanisms.

Resumo Os objetivos deste estudo foram: atualizar a prevalência de disfunção vaginal (DV) em mulheres não grávidas em idade fértil (MEF), mulheres grávidas (EMB) e mulheres menopausadas (MPN), analisar aspectos microbiológicos, avaliar a influência da paridade e contracepção no microambiente vaginal, analisar quadros clínicos e comparar as prevalências das 5 regiões do nosso país: Nordeste, Noroeste, Centro, Cuyo e Sur. 8324 conteúdos vaginais de pacientes de 39 instituições, que compareceram entre maio de 2019 e junho de 2020, foram estudados prospectiva e facilitadoconsecutivamente. As amostras foram analisadas aplicando-se a metodologia padronizada BACOVA-ERIGE (estudo do equilíbrio do conteúdo vaginal e resposta inflamatória genital). Das 8324 amostras de conteúdo vaginal, 5947 (71,5%) corresponderam às MEF; 1627 (19,5%) às EMB e 750 (9,0%) às MNP. O estado vaginal básico (EVB) mais frequente nos três grupos foi EVB I de microbiota normal e representou 33,5% de toda a população global. Foram detectados 66,5% dos estados de disfunção vaginal. No grupo EMB e MNP, um aumento significativo na frequência de EVB I normal foi registrado, em contraste com o grupo MEF, onde foi reconhecido um aumento significativo de EVB de vaginose e vaginite. Em mulheres assintomáticas, foi detectado predomínio de EVB I nos três grupos. Em mulheres sintomáticas foi detetado: nas EMB, predomínio de EVB II e V; nas MEF, predominância de EVB II, IV e V, e nas MNP, predominância de EVB III e V. 56,6% das EMB, 62,8% das MEF e 50,9% das MNP apresentaram DV na ausência de sintomas. Foi detectada associação significativamente positiva entre a presença de leveduras e EVB II e V e a presença de tricomonas e EVB V. A variável antecedente de multiparidade apresentou associação positiva estatisticamente significativa com EVB V e associação negativa com EVB I. Em relação à contracepção, observou-se em mulheres que usavam anticoncepcionais hormonais, que os anticoncepcionais orais aumentaram a frequência de EVB I e II e diminuíram a frequência de EVB III, IV e V de DV; Em mulheres com dispositivo intradérmico, foi observada uma diminuição na frequência de EVB I, II e III e um aumento na frequência de EVB IV e V, e finalmente em mulheres com anticoncepcionais injetáveis, nenhuma associação foi demonstrada. O dispositivo intrauterino diminuiu a frequência de EVB I e II e aumentou a frequência de EVB V; o preservativo aumentou a frequência de EVB IV e o método do ritmo diminuiu a frequência de EVB II. Na EVB I, foi detectada diminuição da frequência de sinais e sintomas. A prevalência de DV em algumas regiões ultrapassou valores de 80%, valor superior ao descrito a nível nacional e internacional, o que reflete a atuação precária e insuficiente em Saúde Sexual e Reprodutiva. O alto percentual de mulheres assintomáticas com DV demonstra a importância da realização do estudo do conteúdo vaginal, mesmo na ausência de sintomas. A história de multiparidade e contracepção mostrou ligação com a função vaginal, refletindo a importância da sua consideração na avaliação ginecológica. Embora a relação da EVB com os sinais e sintomas não constitua uma ferramenta diagnóstica, ela contribui para o entendimento dos mecanismos patogênicos.

Calidad de la toma exo-endocervical en la prevención del cáncer de cuello uterino / Quality of the exo-endocervical sampling in the prevention of uterine cervix cancer

La citología cérvico-vaginal, test de Papanicolaou (PAP), es la técnica diagnóstica de cribado más efectiva para la detección de lesiones precancerosas y la prevención del cáncer de cuello uterino. La sensibilidad de la prueba varía en las diferentes estadísticas entre el 50% y el 98%; la causa de esta amplitud depende de la toma de muestra. Para que la toma se considere satisfactoria es necesario que se realice de la zona escamocolumnar, zona de transformación, y según el sistema Bethesda en el extendido se deben observar células metaplásicas y/o endocervicales. El PAP convencional incluye la toma exo-endocervical con espátula de Ayre; sin embargo, solo el 50% aproximadamente de las muestras son representativas de la zona de transformación. Para ejemplificar esta situación se presenta el caso de una mujer de 40 años que, a pesar de tener citologías negativas durante cinco años, ninguna con células endocervicales o metaplásicas, una toma adecuada mostró un carcinoma in situ (HSIL: lesión intraepitelial escamosa de alto grado). Recalcamos la importancia de la correcta toma exo-endocervical para poder detectar todas las lesiones premalignas y prevenir este tipo de cáncer que aún tiene alta tasa de mortalidad en todo el mundo.

Cervical and vaginal cytology, Papanicolaou test (PAP), is the most effective test for screening of preneoplastic lesions, and cervical cancer prevention. Its sensitivity goes from 50 to 98%, according to different statistics, and this variation is related to the sampling procedure. A satisfactory smear should be taken from the transformation zone, the junction between endocervix and exocervix. According to Bethesda, metaplastic and/or endocervical cells should be observed under the microscope. The traditional PAP smear includes an exo-endocervical sampling using the Ayre spatula; however, only near 50% of the smears are representative of the transformation zone. In this case report, we present the case of a 40-year-old woman who had negative cytology in five consecutive annual PAP smears, none of which showed metaplastic or endocervical cells. A new sample evidenced a carcinoma in situ (HSIL: high-grade squamous intraepithelial lesion). We emphasize the importance of performing a correct exo-endocervical sampling to allow prompt detection of all premalignant lesions and to prevent cervical cancer, which still persists with high mortality worldwide.

Comparación del recuento celular entre un método manual y un contador automatizado en líquidos de derrame / Comparison of manual microscope method and an automated cell count in serous fluids / Comparação da recontagem celular entre um método manual e um contador automatizado em líquidos de derrame

El objetivo del trabajo consistió en comparar el recuento celular total en los líquidos de derrame de cavidades serosas entre el método automatizado empleado en hematología y el método manual en hemocitómetro. Se procesaron 107 muestras: 45 líquidos ascíticos (LA) y 62 líquidos pleurales (LP) a los que se les realizó el recuento celular en cámara de Neubauer y en contador hematológico Sysmex XT 1800i. Se obtuvieron los siguientes resultados: 1) Regresión lineal: los coeficientes de correlación indicaron una alta correlación entre ambos métodos (LA r2: 0,999; p<0,0001 y LP r2: 0,997; p<0,0001). 2) Bland-Altman: El análisis de las figuras muestra una excelente concordancia entre ambos métodos. El error sistemático fue 51 para los LA y 97 para los LP, por lo que estos valores son despreciables dado el valor diagnóstico de los datos. Los resultados demuestran que los métodos son comparables entre sí y, por ende, se puede remplazar el recuento manual por el automatizado, de demostrada eficiencia y exactitud. Sin embargo, todos los líquidos requieren una observación al microscopio óptico previa al procesamiento por el contador hematológico, donde se apreciará la presencia de agrupamientos celulares como, por ejemplo, células neoplásicas en disposición glandular que dificultan el análisis por parte del equipo o la interpretación del resultado.

The purpose of this work was to compare the total cell count in liquids serous cavities between the automated method used in hematology and the manual method hemocytometer. A total of 107 samples were processed: 45 ascites fluids (LA for its name in Spanish) and 62 pleural fluids (LP for its name in Spanish). The cells were counted in improved Neubauer counting chamber and hematology analyzer Sysmex XT 1800i. The following results were obtained: 1) Linear Regression correlation coefficients indicated a high correlation between the two methods (LA r2: 0.999; p<0.0001 LP r2: 0.997; p<0.0001). 2) Bland-Altman analysis graphics showed excellent agreement between both methods. The systematic error was 51 for LA and 97 for LP; these values are insignificant considering the diagnostic value of the data. he results demonstrate that the methods are comparable and therefore can replace the manual counting by the automated method with proven efficiency and accuracy. However, all fluids require observation by optical microscope before being processed by the hematology analyzer, where the presence of cell clusters such as neoplastic cells in glandular disposition will be appreciated, which hinder the analysis by the equipment or interpretation of results.

O objetivo do trabalho consistiu em comparar a contagem total de células em líquidos de derrame de cavidades serosas entre o método automatizado utilizado em hematologia e o método manual em hemocitômetro. Foram processadas 107 amostras: 45 líquidos ascíticos (LA) e 62 líquidos pleurais (LP) nos quais se realizou a recontagem celular na câmara de Neubauer e no contador hematológico Sysmex XT 1800i. Foram obtidos os seguintes resultados: 1) Regressão linear: os coeficientes de correlação indicaram uma alta correlação entre ambos os métodos (LA r2: 0,999; p<0,0001 e LP r2: 0,997; p<0,0001). 2) Bland-Altman: A análise dos Figuras mostra uma excelente concordância entre ambos os métodos. O erro sistemático foi 51 para os LA e 97 para os LP, resultando estes valores desprezáveis dado o valor diagnóstico dos dados. Os resultados demonstram que os métodos são comparáveis entre si e, portanto, pode ser substituída a contagem manual pela automatizada, de eficiência e exatidão demonstradas. Entretanto, todos os líquidos requerem observação no microscópio óptico prévia ao processamento pelo contador hematológico. Nesse momento se apreciará a presença de agrupamentos celulares como, por exemplo, células neoplásicas em disposição glandular que dificultam a análise por parte da equipe ou a interpretação do resultado.

Activation of Epidermal Growth Factor Receptor (pEGFR) and Expression of Argentophilic Nucleolus Organizer Regions (AgNOR) in Seminomas.

Activation of epidermal growth factor receptor (p-EGFR) is one of the triggers in the development of many malignant tumors, and the measurement of Argentophilic Nucleolus Organizer Regions (AgNOR) area is used as a marker of tumor proliferation. Alpha actin smooth muscle (αASM) of peritubular cells (PT) and Vimentin expression are modified during the expansion of the CIS /intratubular germ cell neoplasia (ITGCN) to solid seminoma. We evaluated the expression pEGFR, the AgNOR areas, the expression of αASM in PT and the Vimentin in neoplastic cells from CIS/ ITGCN to solid seminoma. 28 formalin-fixed paraffin-embedded archival tissue blocks of Seminomas from the Departments of Pathology of Clinical Hospital and Ramos Mejía Hospital (CABA, Argentina) were used in this study. pEGFR was expressed in CIS/ ITGCN with membranous pattern (8/9), switching to a cytoplasmic pattern in the solid seminoma (15/19). AgNOR areas of atypical gonocytes were increasing from CIS (3.5±0.3 µ2) to intratubular seminoma (3.8±0.4µ2) (p<.5), until solid seminoma (5.3±0.7 µ2) (p<.01). Increase of AgNOR areas is proportional to the expression of pEGFR. Conclusions: pEGFR was expressed in CIS/ ITGCN with membranous pattern, switching to a cytoplasmic pattern in the solid seminoma. The activation of this receptor could be the first step in the mitogenic signal transduction. AgNOR areas complement diagnosis of testicular CIS, but not differentiate between CIS and intratubular seminoma. The value of AgNOR areas is maximum in the invasive seminoma, and statistically different from intratubular seminoma. The intensity of αASM in PT decreased as the tumor progressed and Vimentin was negative in neoplastic cells.

Biochemical Parameters in Pleural Fluids: New Contributions in the Etiologic Diagnosis of Body Fluids.

Objectives: The aim of this study was to evaluate the usefulness of different cutoffs applied to the cellularity and various biochemical parameters (BP) (metabolic and enzymatic) to contribute to the etiologic diagnosis of pleural fluids (PF). Design and Methods: We studied 150 samples from patients with pleural effusion, admitted to the Clinical Hospital. The cell count was total/mm3 (TCC) and differential. The simultaneous determination in pleural fluid (PF) and serum (S) of BP were performed on Roche Hitachi 917 autoanalyzer: Glucose (GLU), protein (PT), albumin (ALB), cholesterol (COL), triglycerides (TG), lactate dehydrogenase (LDH), creatine kinase (CK), alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (FAL), amylase (AMI), total bilirubin (BT). Statistical methods were c² and Fisher. A value of p<0.05 was considered significant. Results: The most common cause of PF among transudates (T) was the heart failure (26%). In exudates (E), infections (43%) and cancer (25%) were the most frequent causes of PF. A TCC ≥ 500 cells/mm3 increased the detection of exudates without affecting the detection of transudate- type fluids. The PF / S ratio of LDH was the most useful among all BP in differentiating between T and E. PT, ALB, COL PF / S relations, and BT value > 0.5 mg / dl would be also suitable for differentiating T and E, and to a lesser extent PF / S for CK, AMI and SAAG. GLU value < 60 mg / dl showed no utility except in empyema. ALP, AST and ALT did not allow differentiating exudates from transudates. Conclusions: The use of a new cutoff for the TCC ≥ 500 cells / mm3 in the differential diagnosis of PF is suggested. Different BP contributed to the differentiation between E and T.

Respuesta inflamatoria genital en la detección de alteraciones por virus del papiloma humano / The inflammatory genital reaction in the detection of alterations by human papilloma virus / Reagào inflamatoria genital na detecgào de alteragòes por Papilomavírus Humano

Disfunción vaginal (DV) (vaginosis/vaginitis) es el síndrome genérico de mayor prevalencia, alcanzando el 50% de todas las mujeres en edad fértil (sintomáticas y asintomáticas). El virus del Papiloma Humano (HPV) se detecta en 30 a 40% de mujeres en edad fértil (sintomáticas y asintomáticas) y se asocia a alteraciones pre-neoplásicas y a carcinoma invasor del cuello uterino. El diagnóstico sindrómico de DV y alteraciones inducidas por HPV es ineficiente y en la actualidad la morfología (macro y microscópica) es el gold standard, pero requiere ordenamiento. El Estudio del Contenido Vaginal es la prueba de laboratorio bacteriológico de mayor solicitud luego del urocultivo. BACOVA normatiza el diagnóstico de vaginosis/vaginitis y ERIGE aumenta el valor predictivo de células que alertan sobre alteraciones epiteliales. Desde 2007 al presente en los talleres BACOVA ERIGE (tinción de Giemsa) se evaluó la sensibilidad de la detección de células anormales exfoliadas. Un 99% de los participantes coincidió con la detección de koi-locitos. BACOVA/ERIGE no reemplaza al Papanicolaou de ninguna manera, pero puede y debe realizarse en laboratorios periféricos, con lo que además del diagnóstico de vaginosis/vaginitis con 100% de valor predictivo, aumentan la cobertura preventiva de estados proliferativos.

Vaginal dysfunction (DV) (vaginosis/vaginitis) is the generic syndrome of major prevalence, reaching 50% of all women in fertile age (symptomatic and asymptomatic). The Human Papillomavirus (HPV) is detected in 30-40% of women in fertile age (symptomatic and asymptomatic) and is associated to pre-neoplastic lesions and invading carcinoma of the uterine cervix. The diagnosis for the symptoms of DV and the alterations induced by HPV are inefficient and at present, the morphology (macroscopic and microscopic) is the standard gold, but it needs better classification. The Study of the Vaginal Content is the test of major request after urocultives in bacteriological laboratories. BACOVA establishes the procedure for the diagnosis of vaginosis/vaginitis and ERIGE increases the predictive value of cells that give the alarm on epithelial alterations. From 2007 to the present sensitivity in the detection of abnormal exfoliated cells from vagina and uterine cervix was evaluated during the BACOVA - ERIGE, (Giemsa's stain) workshops, 99% of the participants coincided with the detection of koilocytes. BACOVA/ERIGE does not replace the Papanicolaou by any means, but it can and must be performed in peripheral laboratories, where apart from the diagnosis of vaginosis/vaginitis with 100% of predictive value, it is possible to increase the detection of precocious proliferative changes of the squamous epithelium.

Disfungào vaginal (DV) (vaginose / vaginite) é a síndrome mais prevalente genérica, atingindo 50% de todas as mulheres em idade fértil (sintomáticas e assintomáticas). O Papilomavírus Humano (HPV) é detectado em 30-40% das mulheres em idade fértil (sintomáticas e assintomáticas) e está associado a alteragòes pré-neoplásicas e a carcinoma invasivo do colo do útero. O diagnóstico sindrómico de DV e alteragòes induzidas pelo HPV é ineficiente e atualmente a morfologia (macroscópica e microscópica) é o padrào ouro, mas precisa de ordenamento. O Estudo do Conteúdo Vaginal é o exame de laboratòrio bacteriológico mais solicitado, seguido da urocultura. BACOVA normatiza o diagnòstico de vaginose/ vaginite e ERIGE aumenta o valor preditivo de células que alertam a respeito de alteragòes epiteliais. Desde 2007 até hoje, nos workshops BACOVA/ERIGE (coloragào de Giemsa), foi avaliada a sensibili-dade da detecgào de células anormais esfoliadas. 99% dos participantes coincidiram com a detecgào de coilócitos. Bacova/Erige nào substitui o Papanicolaou de forma alguma, mas pode e deve ser feito em laboratórios periféricos, com o qual além do diagnóstico de vaginose / vaginite com 100% de valor preditivo, aumentam a cobertura preventiva de estados proliferativos.

Utilidad clínica de la citología espermática / Clinical usefulness of seminal cytology / Utilidade clínica da citologia espermática

En el examen del semen son importantes las determinaciones de la movilidad, el número y la morfología espermática, sin embargo no resultan suficientes. La observación de las células de la progenie espermática o de otras células epiteliales puede contribuir al mejoramiento del diagnóstico clínico. En el presente trabajo se presentan tres casos de estudios de muestras de sémenes donde la observación citológica fue el criterio más importante para la definición de la patología. Finalmente se discuten imágenes celulares publicadas en el Manual de OMS para el Examen y Procesamiento de Semen Humano, 5a edición, donde se confunden células germinales inmaduras con macrófagos. El propósito del trabajo es poner en evidencia la importancia del conocimiento citológico para una correcta interpretación de ciertas patologías seminales.

Valor del estudio celular del esputo en el seguimiento de las enfermedades inflamatorias de la vía aérea / Value of sputum analysis in the management of inflammatory airway diseases

El análisis celular del esputo, espontáneo u obtenido mediante la técnica de esputo inducido, se ha transformado en una herramienta ampliamente difundida para la evaluación y orientación del tratamiento de las enfermedades inflamatorias de la vía aérea, principalmente asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica y bronquitis eosinofílica. Se han aportado evidencias sobre la utilidad de la técnica del esputo inducido, validada y estandarizada, para ser empleada en pacientes con dificultades para expectorar. Numerosas investigaciones dieron cuenta de la efectividad de basar las decisiones terapéuticas en el componente inflamatorio de la vía aérea mediante el recuento de células en el esputo. Varios estudios mostraron que, en pacientes con asma el análisis celular de esputo guía en la determinación de estrategias para disminuir las exacerbaciones y para mejorar la función pulmonar, aun en pacientes con asma grave, para disminuir el remodelamiento; también se ha descrito su utilidad en pacientes con EPOC, para la disminución de las exacerbaciones.

Cellular analysis of sputum either spontaneous or by induced sputum technique, has become a widespread tool for the evaluation and guidance of treatment of inflammatory diseases of the airway, primarily asthma, COPD and eosinophilic bronchitis. Induced sputum method is a validated, standardized and non-invasive technique, useful in patients with difficulties to expectorate. Its implementation is simple and cost effective. Numerous investigations have shown the effectiveness of basing treatment decisions on the inflammatory component of the airway by counting cells in sputum. Several studies have demonstrated that in patients with asthma, results of this analysis can guide in defining strategies to reduce exacerbations and to improve lung function even in patients with severe asthma, as well as to decrease the remodeling; in addition, a reduction in exacerbations in COPD patients, monitored by this sputum examination, has also been described.

Utility of AgNor, immunocytochemistry for CEA and tumor markers for diagnosis in serous fluids

Objective: The evaluation of serous fluids stained by morphological methods lacks, in many cases, the necessary accuracy to obtain the correct diagnostics. The objective of this work was to establish the value of complementary tools for the improvement of diagnosis in serous effusions. Methods: Fifty-six serous effusions were processed for morphological staining, immunocytochemistry of carcinoembryonic antigen (CEA), AgNOR counting and electrochemiluminescense immunoassay for tumor markers (TM): CEA, Ca125 and CYFRA 21-1. TM assays were also performed in sera from the same patients. The Sensitivity (Se) and Specificity (Sp) were evaluated for all the methods. Results: Cytology: Se 73 per cent, Sp 100 per cent, CEA by immunocytochemistry: Se 96 per cent, Sp 75 per cent, AgNOR:Se 86 per cent, Sp100 per cent, TM: a) in fluids: CEA, Ca125 and CYFRA 21-1, Se: 29 per cent, 66 per cent and 64 per cent respectively and Sp: 100 por cento, 87 por cento and 100 por cento respectively. b) in sera: CEA, Ca125 and CYFRA 21-1: Se: 27 per cent, 77 per cent and 47 per cent respectively and Sp: 100 per cent, 25 per cent and 75 per cent respectively. CEA (in cells) + TM (fluids): Se 100 per cent and Sp 75 per cent AgNOR + TM (fluids): Se 95 per cent and Sp 87 per cent TM Panel (CEA+Ca125+CYFRA 21-1): a) in fluids: Se 81 per cent and Sp 87 per cent b) in sera: Se 86 per cent and Sp 12 per cent Conclusion: AgNOR assay and immunocytochemistry for CEA were useful as complementary tools in the diagnosis using effusions, raising the Sensitivity of the Cytology from 73 per cent to 86 per cent and 96 per cent respectively. Sensitivity increased with the assays for a panel of TM in fluids, but the high costof these methods does not justify their use for non-conclusive smears.

Utilidad de los marcadores tumorales en líquidos de punción pleural / Usefulness of tumor markers in pleural fluids

El diagnóstico de la neoplasia pleural se basa en la demostración de células neoplásicas en fluido pleural (FP) o en biopsias de pleura. Sin embargo, aún en casos de malignidad hay un elevado porcentaje de informes falsos negativos (30-60%). Los FP neoplásicos presentan valores detectables de marcadores tumorales (MT) producidos por las células neoplásicas de la pleura. El objetivo de este trabajo ha sido evaluar la utilidad diagnóstica de algunos marcadores tumorales, de uso corriente en el laboratorio, en los fluidos de punción pleural. En 20 de ellos se analizaron: Antígeno cárcinoembrionario (CEA), fragmentos de la citoqueratina 19 (CYFRA 21-1) y Antígeno CA 125. Se efectuó el estudio fisicoquímico, recuento celular y examen citológico (Papanicolaou). En algunos casos se realizó diagnóstico anátomo-patológico. Los MT se dosaron por inmunoensayo de electroquimioluminiscencia. La comparación se efectuó por Kruskal-Wallis. Las muestras fueron clasificadas en 4 grupos y se determinó en cada uno mediana y rango para CEA (ng/mL), CYFRA (ng/mL) y CA 125 (UI/mL), respectivamente: 1) Citología positiva con diagnóstico previo de cáncer de pulmón (n: 5) 112 (2,3-1.610), 134,4 (45,8-600), 1.048 (498-2999); 2) Citología positiva con diagnóstico previo de cáncer de otro origen (n: 4) 15,28 (1,1-93,80), 108,1 (7,42-497,2), 1.827 (1.103-14.130); 3) Citología negativa con diagnóstico incierto (n: 4) 1,89 (0,91-2,96), 17,1 (1,5-29,6), 578,2 (27,8-12); 4) Citología no concluyente con diagnóstico incierto (n: 7) 31,8 (1,28-370,2), 96,3 (23,8-860), 585 (94,4-4.584). Se observó diferencia significativa entre los grupos. La combinación de citología y MT aumentó el diagnóstico de neoplasia pleural en 25%. Los resultados preliminares permiten concluir que un panel de marcadores tumorales en FP, sumado a los estudios tradicionales, representa una ayuda diagnóstica.

The diagnosis of pleural cancer is supported by the demonstration of neoplastic cells in pleural fluid or in pleural biopsies. However, even in malignancy there are a great number of false negatives results (30-60%). Tumor fluids. To establish the value of different tumor markers, frequently used in clinical laboratories, in the diagnosis of pleural fluids. 20 pleural fluids were processed for physical and chemical study, cellular counting, morphological examination (Papanicolaou stain) and electrochemiluminescense immunoassay for carcinoembryonic antigen (CEA), CYFRA 21-1 and CA 125. The results were analysed by Kruskal-Wallis. In some cases, biopsies were performed. The samples were classified in four groups, and the median and rank were calculated in each case (CEA, CYFRA and CA 125). 1) Positive cytology with previous diagnosis of lung cancer (n: 5) 112 (2.3-1610), 134.4 (45.8-600), 1048 (498-2999) 2) Positive cytology with previous diagnosis of not-lung cancer(n: 4) 15.28 (1.1-93.80), 108.1 (7.42- 497.2),1827 (1103-14130), 3) Negative cytology with uncertain diagnosis (n: 4)1.89 (0.91- 2.96), 17.1 (1.5-29.6), 578.2 (27.8-12, 4) Inconclusive cytology with uncertain diagnosis (n: 7) 31.8 (1.28-370.2), 96.3 (23.8-860), 585 (94.4 -4584). There were stastistic differences among the four groups. Joining the cytology to the assays for tumor markers raised sensitivity by 25%. The assay for tumor markers can be a complementary tool in the diagnosis of effusions.

Células Escamosas Atípicas de Significado Indeterminado: un citodiagnóstico subjetivo / Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance: A subjective cytodiagnosis

El objetivo del presente trabajo es intentar la disminución de la subjetividad que acompaña al citodiagnóstico de células escamosas atípicas de significado incierto (ASCUS) por medio de un parámetro que pueda ser medido y sea útil como valor pronóstico. A 20 extendidos provenientes de cuello uterino coloreados con la técnica de Papanicolaou con diagnóstico de ASCUS (11 metaplasias atípicas, 6 casos de HPV con atipías y 3 casos de anomalías marcadas por hipoestrogenismo) se les aplicó la técnica de AgNOR (regiones del organizador nucleolar afines a Ag) y el área de AgNOR fue medida por citometría de imágenes. Los resultados fueron: 6,0 µ², s=1,60 µ² para metaplasia atípica, 0,90 µ², s=1,05 µ²para HPV con atipías y no detectable para extendidos hipoestrogénicos. Las diferencias entre áreas promedio fueron evaluadas con el test de Student. Se propone 4,4 µ² como valor de corte del área de AgNOR como índice de progresión de las metaplasias atípicas. Los casos de HPV con atipías son insuficientes para definir algún valor de área, y en las pacientes con anomalías marcadas por hipoestrogenismo se recomienda la repetición del extendido post-estímulo estrogénico.

The objective of this paper is to diminish the subjectivity of ASCUS (Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance) diagnosis by means of a parameter useful in the prognosis of the pathology. AgNOR technique was applied to 20 cytologic smears from uterine cervix stained by Papanicolaou method and with ASCUS diagnosis: 11 atypical metaplasias, 6 with atypical keratinizing cells related to human papillomavirus (HPV) infection and 3 with regressive changes by estrogen deficiency. The AgNOR area was determined by image cytometry. The mean AgNOR areas were: 6.0 µ², s=1.60 µ² for atypical metaplastic cells, and 0.90 µ², s=1.05 µ² for smears with HPV with atypical keratinizing cells. AgNOR areas were not measurable in the cases of estrogen deficiency. Differences in the mean AgNOR protein areas were tested by Student's test. The cut-off value proposed for smears with atypical metaplastic cells is 4.4 µ² as a limit of progressive lesions. It was not possible to establish a value for cases with atypical keratinizing cells related to HPV because of the low number of smears. In estrogen deficiency, it is advisable to perform the estrogenic stimulus before taking any decision.

La estria supranuclear de las células ciliadas en la rinitis alérgica / Supranuclear stria of ciliated cells in allergic rhinitis

Se estudiaron 80 pacientes adultos alérgicos, que cursaron con los siguientes cuadros clínicos: 16 casos de rinitis intermitente y 64 de rinitis persistente. Se realizó el recuento porcentual de la estría supranuclear de las células ciliadas, respecto de los leucocitos presentes en los extendidos obtenidos por toma endonasal. Con los datos obtenidos se clasificaron los extendidos en 4 grupos; Grupo A (N=23): predominio leucocitario eosinófilo con eosinofilia nasal >10%, Grupo B (N=15): abundantes leucocitos neutrófilos y eosinofilia nasal >10%, Grupo C (N=29): con escasos leucocitos, Grupo D (N=13): con abundantes leucocitos de predominio neutrófilo sin eosinofilia. Se observó que el incremento porcentual de estría supranuclear se correlacionó con eosinofilia nasal >10% y con las muestras que presentaron escasos leucocitos. Sin embargo se evidenció una marcada disminución del porcentaje de estría supranuclear en la leucocitosis neutrófila de etiología bacteriana.

Nasal secretions were studied in 80 allergic adults patients: 16 with intermittent rhinitis and 64 with persistent rhinitis. The percentage of supranuclear stria of ciliated cells with regard to leucocytes was studied by nasal scraping. Four groups of patients were classified according to nasal leucocytic predominance: patients with eosinophilic predominance with eosinophils > 10% in Group A (N=23), patients with abundant neutrophils and eosinophils >10% in Group B (N=15), patients with scant leucocytes in Group C (N=29), patients with neutrophilic predominance without eosinophils in Group D (N=13). An increase of supranuclear stria percentage was correlated to eosinophils > 10% and also correlated to scant leucocytes. Nevertheless, a significant decrease of supranuclear stria percentage was observed in neutrophilic leukocytosis of bacterial etiology.

Técnica de detección de la región del organizador nucleolar en células exfoliadas de cuello uterino / Technique for the assay of nucleolus organizer region in exfoliated cells from uterine cervix

La técnica de detección de la región del organizador nucleolar (AgNOR) fue aplicada a 22 extendidos citológicos de exo y endocervix: 5 con células endocervicales, 2 hipotróficos (controles), 2 atróficos, 4 inflamatorios, 2 con células metaplásicas, 4 con células metaplásicas reactivas y 3 de lesiones intraepiteliales de bajo grado. Los promedios de partículas de AgNOR y el área coloreada aumentaron desde los controles hasta las células metaplásicas reactivas. Esta técnica permite identificar células exfoliadas del cuello uterino con mayor capacidad proliferativa, lo que resulta de utilidad en el citodiagnóstico de lesiones sospechosas en las coloraciones de rutina con el método de Papanicolaou

Células de Langerhans y lesiones intraepiteliales de cuello uterino / Langerhans cells and intraepithelial lesions of the uteri cervix

Las células de Langerhans fueron demostradas por un método inmunohistoquímico con el anticuerpo anti proteína S-100 en 22 cortes histológicos de cuello uterino: 6 controles, 8 lesiones intraepiteliales de bajo grado y 8 lesiones intraepiteliales de alto grado, en las cuales se tipificó virus de Papiloma Humano. El número de células de Langerhans decrece desde los epitelios normales hasta las lesiones de alto grado (controles: 186 ñ 5/mm², lesiones de bajo grado: 155 ñ 33/mm² y lesiones de alto grado: 39 ñ 17/mm²). Siendo dichas células importantes en el reconocimiento y procesamiento de antígenos exógenos, su disminución en casos de infecciones por virus de Papiloma Humano de alto riesgo se relacionaría con la progresión de la lesión

Utilidad de la técnica de AgNOR en la interpretación de los derrames de cavidades serosas / Usefulness of AgNOR assay in the assessment of serous effusions

Background: AgNOR technique detects, using silver salts, argyrophylic proteins of the nucleolar organizer region (NOR). The number and size of NOR reflect cell activity, proliferation and transformation and may help to differentiate benign from malignant cells. Aim: To assess the value of AgNOR assay to differentiate reactive mesothelial cells from malignant cells in serous effusions. Material and methods: Thirty one fluids obtained from 16 pleural, 14 peritoneal and one pericardial effusion, were studied. The fluids were processed with Giemsa and Papanicolau stains and with the AgNOR technique. The number of AgNOR dots were counted (only when it was possible to distinguish each individual dot) and the mean value per nucleus was calculated for each smear. Results: Mesothelial cells had a mean of 4,88 ñ 1,5 dots compared with 13,78 ñ 3,88 dots in the malignant cells (p<0,001). Conclusions: AgNOR assay can be useful for the differentiation of benign and malignant cells in serous effusions

Lesiones intraepiteliales de cuello uterino: marcadores bioquímicos y virus de papiloma humano / Intraepithelial lesions of the uterine cervix: biochemical markers and human papillomavirus

Con el fin de establecer el valor de ciertos marcadores indicadores del grado de evolución de las neoplasias intraepiteliales cervicales (CIN), se realizó la determinación de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) por enzimoquímica y de antígeno carcinoembrionario (CEA) por inmunomarcación en biopsias y extendidos citológicos, procedentes de cervix uterinos en casos de infección por virus de papiloma humano (HPV) y de CIN de diferentes grados (CIN 1 a CIN 3). La actividad de G6PDH, ensayada en células exfoliadas, fue en aumento desde CIN 1 a CIN 3, donde alcanzó el nivel 3+ en una escala fijada con un máximo de 4+ para el carcinoma pavimentoso. El CEA, demostrado en cortes histológicos y en células exfoliadas de diversas patología de cérvix uterino, varió desde 1+ en las lesiones de bajo grado hasta 3+ en las de alto grado. De los datos obtenidos en G6PDH y CEA, podría inferirse que las lesiones intraepiteliales de cérvix uterino se suceden en forma continua desde la lesión viral hasta CIN 3. Se realizó la tipificación de HPV mediante hibridación in situ. En los condilomas y CIN 1 fue detectado HPV 6/11 episomal y en los CIN 2 se encontraron tipos virales de moderado y alto riesgo predominantemente libres. Todos los CIN 3 fueron positivos para HPV 16/18 en estado integrado. Sin embargo, la presencia de HPV 16/18 no sería un factor por sí mismo suficiente para la completa transformación celular, aunque su presencia sea necesaria para la promoción de la neoplasia cervical

Cells with dyskeratotic inclusions in smears from cervix uteri infected by human papillomavirus

An addictional feature has been reported in cervical smears from patients with human papillomavirus (HPV) infection: the "cell inside another cell", that shows inclusion bodies in addiction to a nuclear smudging (cell with dyskeratotic inclusions: CDI). We observed smears from 129 patients with diagnosis of Hpv infection of the cervix uteri, stained by Papanicolaou technique. Koilocytes were observed in 48,8 porcento of the patients, and CDI in 30,2 porcento of them. CDI was presented by 19,3 porcento of the patients. The CDI could not be related to a special type of HPV, therefore it is not a parameter for estimation of the oncogenic risk. Further studies are needed to clarify if CDI could be other indirect feature suggestive of HPV infection.

Configuration of the surfaces of epithelial cells infected by human papillomavirus

Tipos de papilomavírus humano foram investigados por hibridização in vitro, por meio de biópsias realizadas em 18 pacientes com diversas patologias do colo do útero (7 condilomas, 1 NIC I + HPV, 3 NIC II, 4 NIC II + HPV e 3 NIC III). Esfregaços cervicais dos mesmos pacientes foram processados por microscopia de elétrons, para se estudar a configuração das superfícies de células infectadas por diferentes tipos de HPV. Sete condilomas, 1 NIC I + HPV, 3 NIC II e 3 NIC II + HPV mostraram configurações de superfície quase idênticas àquelas de células normais (curtas, finas microvilosidades homogêneas ou microfibras típicas). Este grupo apresentou baixos, moderados e altos riscos para tipos de HPV em forma epissomal, ao passo que 1 NIC II + HPV e 3 NIC III com HPV 16/18 integrados apresentaram células cobertas com microvilosidade macroscópica, de tamanho variável e distribuição desigual, ou uma superfície amorfa. A presença de HPV 16/18 não é bastante para o desenvolvimento de uma configuração anormal, mas o estado integrado deste tipo viral pode estar relacionado a alterações morfológicas da superfície celular. Os resultados deste trabalho ressaltam a importância da integração viral na gênese do carcinoma cervical.